### 产品介绍与特点

本产品是一款基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具有以下显著特点：

1. **即开即用**：用户只需提供样品DNA模板，无需其他复杂步骤。
2. **高灵敏度**：通过优化引物等组分，实现高灵敏度的检测。
3. **阳性对照**：提供阳性对照，使得区分假阴性样品更为简便。
4. **特异性强**：引物根据中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区设计，确保与其他生物样本DNA不发生交叉反应。
5. **定性与定量兼顾**：本试剂盒可用于定性和定量检测，定量检测的线性范围至少为5个数量级。
6. **使用次数**：本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. **科研专用**：本产品仅限科研用途。

### 使用方法

**一、DNA提取（样本制备区）**：采用自选方法提取和纯化样品DNA，确保与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
**二、稀释标准曲线样品（样本制备区）**：
（注意：由于阳性对照浓度较高，稀释操作必须在独立区域进行，避免污染。）
1. 标记6个离心管，分别为7, 6, 5, 4, 3, 2。
2. 向每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，放冰待用。
4. 依次在6号、5号管中加入前一步稀释所得的阳性对照，震荡并放冰待用，直至得到6个不同稀释度的标准曲线样品。
若不需制作标准曲线，阳性对照可直接稀释至1×10E5拷贝/μL。
**三、试剂配制（试剂准备区）**：根据待检样品的数量准备对应的PCR管，加入相应成分，详见说明书。
**四、添加模板（模板添加区）**：向qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为阴性对照、待测样品模板、阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。
**五、扩增反应（扩增及产物分析区）**：将PCR管放置于PCR扩增仪器，按照程序进行扩增。
**六、结果分析**：
1. 若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴，绘制标准曲线，再根据待测样品Ct值推算其DNA浓度的log值。
2. 若未制作标准曲线，结果判定标准如下：阳性对照Ct值<30，曲线呈S型；阴性对照Ct值≥38或无Ct值，且无指数增长；样本检测结果Ct值<35则为阳性，Ct值≥38则为阴性，Ct值在35-38范围需复检。

### 运输与保存

产品应低温运输并储存于-20℃，有效存放期限为一年。阳性对照需单独存放，以避免污染其他试剂。

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