细胞融合的技术手段多样，常见的方法包括转动法和离心法。在进行融合时，脾细胞和骨髓瘤细胞的比例通常为1:1至10:1之间，其中3:1或5:1的比例最为常用。

1. 所需试剂与材料

(1) 供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。

(2) 100ml的1640培养液。

(3) 100ml的完全1640液。

(4) 50ml的25% FCS－1640液。

(5) 100ml的HAT培养液。

(6) 50% PEG：取分子量4000的高纯度PEG（如日本进口或Serva），10g放入25ml瓶中进行高压灭菌。使用前，将预热至40℃的1640液10ml等量混合，并用酚红检查pH，一般情况下无需调整。如需调整，可使用HCl或NaHCO3。

(7) 10ml及50ml的灭菌沉淀管或瓶。

(8) 40孔塑料培养盘。

2. 操作步骤

(1) 准备脾细胞。

(2) 在50ml沉淀管中混合108脾细胞与107小鼠骨髓瘤细胞，并添加50ml的25% FCS－1640液。

(3) 在室温条件下，以400g的速度离心3分钟，促使细胞沉淀。

(4) 移除上清液。

(5) 轻轻敲击管底，使沉淀物流动，然后将沉淀管放入40℃的水浴中，使其达到融合温度。

(6) 将8ml预热至40℃的50% PEG缓慢滴加到沉淀管中，边加边轻轻摇动，观察到颗粒形成，滴加过程应持续2分钟。

(7) 添加1ml的1640液，边加边摇动，持续1分钟。

(8) 重复步骤7一次。

(9) 再次添加1ml的1640液，边加边摇动，持续0.5分钟。

(10) 重复步骤9一次。

(11) 添加15ml的1640液。

(12) 在室温下以400g离心1分钟，使细胞沉淀。

(13) 移除上清液，轻轻敲击管底，添加25ml含有HAT的完全1640液。

(14) 将融合的细胞液逐滴加入已前一日种有饲养细胞的40孔塑料培养盘，每孔1滴（约0.05ml）。

(15) 轻轻摇动后，放置于5% CO2、饱和湿度的37℃培养箱中培育。

(16) 在第3、6、9和10天更换为含HAT的完全1640培养液，注意轻吸上清液，避免吸出附着在孔底的细胞，根据需要补充适量的饲养细胞。

(17) 在第12和15天再次加入含有HAT的完全1640培养液。在每次更换液体前，用倒置显微镜观察，大约在10天左右即可观察到杂交瘤细胞的生长。大多数杂交瘤细胞会在10~20天内出现，也有可能在一个月后才被发现。出现杂交瘤细胞后，需吸取上清液并检查抗体。

(18) 对继续生长的杂交瘤细胞进行增殖传代。在传代过程中，可根据实际情况取消HAT液，改用10% FCS－1640液。同时，将部分细胞保存于液氮中并进行克隆化。需在每个传代过程中检查抗体，防止抗体细胞的变异与丢失。

在细胞融合和抗体生产的过程中，选择优秀的生物技术设备和试剂供应商显得尤为重要，例如88858cc永利官网，提供高质量的产品，助力科研工作和临床应用的顺利进行。