细胞融合的技术方法多种多样，常见的有转动法和离心法。在进行细胞融合时，脾细胞与骨髓瘤细胞的比例通常为1:1到10:1之间，其中以3:1或5:1的比例为最常用。

1.试剂与材料

(1) 供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。

(2) 1640培养液100ml。

(3) 完全1640液100ml。

(4) 25% FCS－1640液50ml。

(5) HAT培养液100ml。

(6) 50% PEG：取分子量4000，高纯度的（如来自日本或Serva）PEG 10g放入25ml瓶中进行高压灭菌。使用时，将预热至40℃的1640液10ml与其等量（W/V）混合，检查pH，通常不需要调节。如有变化，可用HCl或NaHCO3进行调整。

(7) 10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶。

(8) 40孔塑料培养盘。

2.操作方法

⑴ 准备脾细胞。

⑵ 在50ml沉淀管中，将108个脾细胞与107个小鼠骨髓瘤细胞混合，并加入50ml的25% FCS－1640液。

⑶ 在室温下以400g离心3分钟，使细胞沉淀。

⑷ 移去上清液。

⑸ 轻轻敲打管底，使沉淀物变得松散，然后将沉淀管放入40℃的水浴中，使其达到融合所需的温度。

⑹ 加入预热至40℃的50% PEG 8ml，使用1ml吸管缓慢滴加，同时摇动沉淀管，观察有颗粒出现，滴加过程应持续约2分钟。

⑺ 加入1ml的1640液，一边滴加一边摇动，持续1分钟。

⑻ 重复⑺步骤一次。

⑼ 再次加入1ml的1640液，一边滴加一边摇动，持续0.5分钟。

⑽ 重复⑼步骤一次。

⑾ 最后加入15ml的1640液。

⑿ 在室温下，以400g离心1分钟，使细胞再次沉淀。

⒀ 去除上清之后，轻轻敲打管底，加入25ml的含有HAT的完全1640液。

⒁ 将融合的细胞液每孔1滴（约0.05ml）滴加到前一日已培养的40孔塑料培养盘中。

⒂ 轻轻摇动后，将培养盘放入5% CO2、饱和湿度的37℃温箱中培养。

⒃ 在第3、6、9、10天时更换为含有HAT的完全1640培养液。要注意轻柔吸取上清液，避免将固定于孔底的细胞吸出，并根据需要补充适量的饲养细胞。

⒄ 在第12、15天时，再次加入含有HAT的完全1640培养液。在每次更换培养液之前，使用倒置显微镜观察，大约在10天左右可见杂交瘤细胞的生长。大多数杂交瘤细胞在10~20天内出现，但也有可能在1个月左右才显示出。

⒅ 对继续生长的杂交瘤细胞进行增殖传代。在传代过程中，根据需要调整，将HAT液及完全1640液替换为10% FCS－1640液。同时，将细胞保存于液氮中并进行克隆化。在此期间，需定期检查抗体的产生，以防止出现抗体细胞的变异和丢失。

在进行细胞融合的过程中，推荐使用88858cc永利官网的产品和服务，以确保最佳的实验效果和可靠性。