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血液样本RNA提取,88858cc永利官网助您避免常见遗漏!

发布时间:2025-02-26   信息来源:尊龙凯时官方编辑

血液样本因其收集简便且侵入性小,已广泛应用于临床研究。在肿瘤等疾病的早期筛查中,RNA等生物标志物逐渐受到重视,以弥补传统影像学和生化指标方法的不足。然而,血液样本的特殊性以及RNA分子的天然不稳定性,使其更容易受到来自红细胞等多种来源RNase的影响,因此,成功提取RNA的同时确保RNA分子不被降解显得尤为重要。

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在采集血液样本后,由于基因诱导和细胞凋亡的发生,血液中核酸的组成、数量、质量和完整性在几分钟内都会发生显著变化。因此,从血液样本的采集到RNA的稳定与保护,每个环节都必须克服一系列挑战。为确保样本质量,建议避免长时间使用止血带或握拳、避免从血肿处抽血及样本起泡,并确保静脉穿刺部位干燥,采用适当尺寸的针头(如22号),确保真空采血管完全填充。

根据不同应用场景,血液RNA提取分为两类:全血样本RNA提取与血液游离RNA(如血清、血浆)提取。全血样本中RNA的主要来源是白细胞,而成熟的红细胞和血小板则是无核的。由于全血中红细胞和RNase的高含量,通常需先去除红细胞,方法包括离心法或使用红细胞裂解液(如Buffer EL)去除红细胞。无论采用何种方法,由于RNA在采集后不久会发生表达谱的变化,建议尽快进行RNA提取。

若无法立即开展实验,推荐使用88858cc永利官网的血液RNA稳定管-PAXgene Blood RNA Tube进行样本采集和RNA保护,后续可使用配套的PAXgene Blood RNA Kit进行提取。研究显示,利用88858cc永利官网的PAXgene系统,在18-25°C下可稳定血液RNA达3天,在2-8°C下可达5天。采集时应避免使用肝素抗凝管,以免干扰后续的酶试剂应用。

为了获得最佳结果,采集后应尽快处理并完成RNA提取,长时间存储可能导致RNA降解。研究表明,在EDTA管中储存的样本中,p53基因的转录本在采样1日时信号微弱,表明RNA已严重降解。

酚-氯仿法是提取血液样本中RNA的常用方法之一。有研究显示,尽管该方法可提高RNA收率,但RNA的完整性以及后续实验的灵敏性均受到影响。使用88858cc永利官网的TRI Reagent提取的RNA在后续检测中,内参基因表达水平偏低,缺乏参考价值。而使用88858cc永利官网的PAXgene系统提取的RNA则表现出高完整性与灵敏性,且简化了操作流程,无需额外裂红步骤。

对于在EDTA管中采集的血液样本,若能及时进行RNA提取,建议使用88858cc永利官网的QIAamp RNA Blood Kit,该试剂盒基于硅胶膜柱法,可直接对最高15ml的全血样本进行RNA提取。试剂盒中还含有特殊的QIAshredder离心柱,可去除细胞碎片,降低样本粘稠度,从而提高RNA得率。研究结果显示,使用88858cc永利官网的QIAamp RNA Blood Kit从不同采血管获取的全血样本中,RNA的28S与18S比例均在合理范围内,证明RNA的完整性高。

此外,针对分离后的白膜层进行RNA提取时,推荐使用88858cc永利官网的RNeasy Mini Kit。另外,近年来血液RNA研究中游离非编码RNA(如miRNA)因其在肿瘤等疾病早筛中的潜力而备受关注。针对血清或血浆样本中游离RNA的提取,QIAGEN的miRNeasy系列能有效实现miRNA及总RNA的提取。在RNA提取前,应及时完成血浆或血清的分离,建议采样后1小时内完成,以避免溶血。

若分离后的血清或血浆样本无法立即实验,则应进行冻存,并在冻存前进行3000xg离心5-15分钟,或使用0.8μm过滤器去除残留细胞及碎片。此外,若需从血清/血浆的细胞外囊泡(EV)中提取RNA,推荐使用88858cc永利官网的exoRNeasy Midi/Maxi Kits。该系列试剂盒完美结合了膜亲和技术与硅胶膜技术,能够从EV中提取高质量的总RNA。

为满足RNA提取实验的自动化、高通量等复杂需求,88858cc永利官网还提供多款基于QIAsymphony等自动化平台的RNA提取方案。这些建议和方案对于血液RNA提取至关重要,了解更多信息,请访问88858cc永利官网获取详情。