一、概念

1、细胞系（Cell Line）：细胞系是在原代培养成功传代初期形成的细胞群体，主要由初始培养物中的细胞世系（Lineage of Cells）构成。

2、细胞株（Cell Strain）：通过选择或克隆技术从原代培养物或细胞系中筛选出的具有特定特性或标志物的细胞称为细胞株。细胞株的特性或标志必须在整个培养过程中保持稳定。若细胞无法持续传代或者传代次数有限，则定义为有限细胞株（finite cell strain）；若可以长期传代，则称为连续细胞株（continuous cell strain）。对于人类肿瘤细胞，若在体外培养超过六个月且生长稳定且可持续传代，则可被称为连续性株或系。

二、建立细胞系（或株）的要求

对于哪些体外培养细胞可以被认可为已鉴定的细胞，具体情况视不同条件而有所不同，并没有统一的标准。对于用作原代培养的细胞，只要供体均一且取材部位和组织类型稳定即可，特别是对于长期培养和反复传代的细胞，通常需要提供以下信息：

1、组织来源：需说明细胞供体所属物种，是否来自人体或动物，个体性别、年龄及取材器官或组织的信息。如为肿瘤组织，需提供临床和病理诊断以及病历号等详细资料。

2、细胞生物学检测：了解细胞的普遍与特殊生物学特征，包括细胞形态、特异性结构、细胞生长曲线、分裂指数和倍增时间等。此外，对于肿瘤细胞，需通过软琼脂培养、异体接种致瘤实验以及正常组织侵润力实验来确保细胞来源于原肿瘤并保持恶性特性。

3、培养条件和方法：需说明细胞系（或株）的生存环境，包括使用的培养基、血清类型及用量以及适宜的pH值。

三、细胞建株的要点及基本过程

（一）肿瘤细胞培养技术要点

1、取材：材料应主要来源于外科手术或活检的肿瘤组织，需避免使用坏死组织，并选择肿瘤细胞更为集中且活力较好的部分。肿瘤性转移淋巴结或胸腹水是较为理想的培养材料。取材后应尽快进行培养，如不能立即培养，可选择冷冻保存，使用的培养和冷冻方法应与正常组织一致。

2、成纤维细胞排除：肿瘤组织中通常会混有成纤维细胞，这些细胞可与肿瘤细胞共同生长，并可能抑制癌细胞的生长，导致其消失。因此，在培养中需仔细排除成纤维细胞，常用的排除方法包括机械刮除法、反复贴壁法、消化排除法及胶原酶消化法等。

3、提高肿瘤细胞培养存活率与生长率：根据实验经验，肿瘤细胞在体外培养较为困难，建立可传代的肿瘤细胞系尤为不易。在原代培养后，肿瘤细胞需适应新环境才能实现生长，因此需要采用特殊措施，如使用合适的底物（如鼠尾胶原底层等）和细胞生长因子（如胰岛素、氢化可的松、雌激素等）。另外，也可考虑使用动物媒介培养。

（二）人类淋巴母细胞建株方法

1、在离心管中加入4ml肝素抗凝血，再加入2ml RPMI 1640培养基。

2、混合后沿管壁缓慢加入至预置的4ml淋巴细胞分离液上，并静置30分钟。

3、以1500 rpm进行离心15分钟，吸取白细胞层（第二层）至另一离心管中。

4、加入5ml RPMI 1640对白细胞进行两次洗涤。

5、将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl EBV（EB病毒）液，充分混合。

6、在水浴摇床中以40次/分速，37℃培养3小时。

7、以1500 rpm离心15分钟，将细胞接种至含1mM/ml谷氨酰胺的1ml培养基中，加入10μl环胞霉素，轻轻混合并在37℃下进行培养。

8、5天后观察细胞转化及生长情况，判断是否需要进行半量换液。一般进行1-2次半量换液，维持环胞霉素的浓度。

9、待转化细胞数量明显增加并出现细胞团块后，将其转入25ml培养瓶中，加入1-2ml培养基，在37℃下培养10-15天，通常每3-4天观察一次，以决定是否换液和传代。

10、细胞生长到达一定数量后应进行冻存，冻存前需进行核型分析并做好存档。

通过以上步骤和注意事项，可以有效地建立与维护细胞系或细胞株，从而推动生物医学研究的深入进行。如果您对细胞培养和分析有更多需求，欢迎访问[88858cc永利官网]，获取更专业的支持与解决方案。