人卵巢癌细胞A2780培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人卵巢癌细胞A2780

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S

传代方法：第一次建议1:2传代，2天更换培养液.

备注：使用无菌离心管收集培养基，留作对比培养。如对比效果不理想，建议选用88858cc永利官网提供的完全培养基。

二、细胞处理步骤

收货后，待细胞状态良好后，将其灌满完全培养液并密封。这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，用75%酒精对整个细胞瓶消毒，并在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行处理。对细胞生长情况进行显微镜观察，并拍照保存（推荐40×、100×、200×各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片，默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在未超过80%汇合度时，将完全培养液收集至离心管中，保留5ml，放入37℃、5% CO2环境中培养；若细胞密度超80%，进行以下传代步骤：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，37℃培养1-2分钟，观察细胞情况。一旦细胞多数变圆并脱落，迅速终止消化反应。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，吸出悬液，转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），并补充5-8ml新完全培养基，最后置于37℃，5% CO2的培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液，轻轻吹打使其脱落。
3. 转移悬液至离心管中，1000RPM离心5分钟。
4. 弃上清后，加入1ml雅吉生物无血清冻存液，混匀后装入冻存管。将其放入-80℃冰箱，若需转移至液氮罐，请先在-80℃保存24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，放入37℃水浴中解冻，待无结晶后，用75%酒精消毒外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

对某些细胞，其贴壁性可能较差，运输过程中可能出现细胞脱落的现象，这属正常情况。请将培养液收集于离心管，1000RPM离心5分钟并收集上清以供后续对比。如果细胞状态不佳，请根据操作步骤及时处理。

五、售后条款

1）可重发的情况及判定标准：

1. 细胞在运输过程中出现的各种问题，如细胞丢失、瓶身破损等，支持重发.
2. 收到产品48小时内如碰到污染问题，请提供真实实验结果，核实后重发。
3. 细胞在静置或复苏后存活率问题需提供清晰的状态照片以支持重发。
4. 细胞活性问题须在7天内提供实验结果。
5. 收到后48小时内若未告知，视为合格。

2）不予重发的情况：

1. 客户造成的细胞污染等情况，不重发。
2. 使用非推荐培养体系导致细胞状态不佳，亦不重发。
3. 未按要求拍照及反馈不重发。

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