### 小鼠纤维肉瘤细胞MCA-205培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞

生长特性：细胞以贴壁生长为主

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640+10%FBS

传代方法：建议第一次传代比率为1:2

传代情况：每两天更换培养基

备注：使用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接使用我们的88858cc永利官网的完全培养基。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，待其生长至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口是保护运输过程中的细胞的最佳方法。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后将其放在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后进行后续处理。使用显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（最好分别为40x、100x、200x各一张）。前几天的照片是重要的售后依据，若未提供照片，默认收到时状态良好。

三、细胞培养步骤

1. 细胞传代： 当细胞的汇合度未超过80%时，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基放在37℃、5% CO2孵箱中培养；当细胞密度超过80%，进行传代；具体步骤如下：

(1) 弃去培养上清，使用不含钙镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

(2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，当细胞大部分变圆并脱落时，迅速加入5ml以上的完全培养基以终止消化。

(3) 轻轻吹打细胞，直至其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬细胞。

(4) 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代至两个T25瓶中，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

2. 细胞冻存：

(1) 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次；

(2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，然后轻轻吹打使细胞脱落，再转移至15ml离心管中并在1000 RPM离心5分钟；

(3) 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中；

(4) 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期要转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放超过24小时后再转入液氮罐。

3. 细胞复苏：

(1) 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭外壁；

(2) 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；

(3) 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬后接种至T25培养瓶，并放于37℃、5% CO2细胞培养箱中；

(4) 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项：

部分细胞在运输过程中可能会出现贴壁不牢、脱落的现象，这属于正常情况。需将培养瓶内所有培养液收集至离心管，经过1000 RPM离心5分钟后，将上清液收集作过渡培养，之后进行细胞重悬和传代培养操作。

五、售后条款：

1. 可能重发的情况：

如果存在细胞运输损坏、细胞污染等情况，可提出重发要求。具体包括：运输途中出现问题导致的细胞丢失、瓶身破损；48小时内提出的细胞污染问题；干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内未存活等情况（需提供真实的细胞状态照片）。

2. 不予重发的情况：

如因客户操作不当导致的细胞污染或状态不好，不会进行重发。同时使用非本库推荐的细胞培养体系也不予重发。

如需使用优质细胞培养产品，欢迎选择88858cc永利官网，我们提供全方位的客户服务与支持。