88858cc永利官网为生物医学研究提供了一套详细的类器官原代培养流程，以下是该流程的概述与步骤。

一、准备工作

1. **仪器设备：** CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、冷冻离心机、水浴锅或水浴摇床、医用冰箱、-80℃冰箱、移液器、眼科剪和眼科镊等。

2. **试剂耗材：** 以肠癌类器官为例，需准备培养基试剂盒、基质胶、细胞培养皿、滤筛、离心管及传代培养板等。具体组分包括：

• 类器官培养基 A 100mL
• 培养缓冲液 B 250mL
• 组织消化液 C 30mL
• 传代消化液 D 30mL
• 保存液 E 100mL
• 冻存液 F 20mL
• 传代培养缓冲液 G 250mL

二、操作流程

1. 样本准备

将组织置于4℃的组织保存液中，并在获取样本时进行消毒和登记其信息（如大小、颜色等）。

2. 清洗-剪碎

用培养缓冲液清洗组织，剪成小块，转移至离心管中。

3. 消化-过滤

将消化液加入离心管，进行消化及细胞观察，利用滤筛过滤，收集滤液进行离心，去除上清液。

4. 加胶-点板-加液

准备基质胶和培养基，并按照标准密度混合后点板，再在培养箱中供其成胶。经过10-14天的培养，类器官一般达到200um-500um的直径，适用于传代操作。

三、类器官传代

1. 类器官收集和洗涤

使用培养缓冲液进行洗涤，用离心操作分离类器官并去除基质胶层。

2. 类器官消化

在超净工作台中添加消化液进行消化，确保保留细胞团，随后使用缓冲液终止消化，去除上清。

3. 加胶-点板-加液

与原始培养步骤相似，选择适当的接种密度，以保持类器官的活性及生长。

四、类器官冻存

1. 类器官收集与洗涤

使用缓冲液对类器官进行处理，确保有效去除基质胶，分层离心以保留类器官沉淀。

2. 类器官冻存

添加适量冻存液，并进行适宜的梯度冻存，以最大限度降低对细胞的损伤。

五、复苏操作

1. 实验前准备

预热水浴锅，进行超净工作台消毒，准备好必要仪器与材料。

2. 取出冻存管

从液氮罐中取出所需冻存管，进行仔细核对。

3. 迅速解冻与后续操作

迅速将冻存管放入水浴锅中解冻，同时进行必要的离心和重悬操作，加入基质胶及培养液，最后在培养箱中继续培养，最终可进行传代。

    以上为类器官原代培养的精细过程。任何生物医学领域的研究者均可依此流程进行实验，获得更高质量的类器官样本。欢迎联系88858cc永利官网获取更多产品与支持。